蛋白质在水溶液中的溶解度是由蛋白质周围亲水基团与水构成水化膜的程度,以及蛋白质分子带有电荷的状况决议的。当用中性盐参加蛋白质溶液,中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质,所以蛋白质分子周围的水化膜层削弱甚至消失。一起,中性盐参加蛋白质溶液后,因为离子强度产生改动,蛋白质外表电荷很多被中和,愈加导致蛋白溶解度下降,使蛋白质分子之间集合而沉积。
称 (NH4)2SO4(AR)400~425克,以50~80℃之蒸馏水500ml溶解,拌和20分钟,趁热过滤。冷却后以浓氨水(15NNH4OH)调 PH至7.4。制造好的饱满硫酸铵,瓶底应有结晶分出。
使用液:取A液81ml加B液19ml混合,再以生理盐水作10倍稀释即成。
一般冰箱、离心机、电磁拌和器,751桮型紫外分光光度计、扭力天平,粗天平。
透析袋、尼龙绳、细竹棒、精细PH试纸 (PH5.5~9.0)、眼科镊子、小剪刀。
离心(3000rpm), 20分钟,弃上清,以生理盐水溶解沉积至Xml。
将透析袋内样品取少数作恰当倍数稀释后,以751-G紫外分光光计测蛋白含量。
1.蛋白质的浓度:盐析时,溶液中蛋白质的浓度对沉积有两层影响,既可影响蛋白质沉积极限,又可影响蛋白质的共沉效果。蛋白质浓度愈高,所需盐的饱满度极限愈低,但杂蛋白的共沉效果也随之添加,从而影响蛋白质的纯化。故常将血清以生理盐水刁难倍稀释后再盐析。
2.离子强度:各种蛋白质的沉积要求不同的离子强度。例如当硫酸铵饱满度不同,分出的成分就不同,饱满度为50%时,少数白蛋白及大多数拟球蛋白分出;饱满度为33%时γ球蛋白分出。
4.PH值:一般说来,蛋白质所带净电荷越多,它的溶解度越大。改动PH改动蛋白质的带电性质,也就改动了蛋白质的溶解度。
5.温度:盐析时温度要求并不严厉,一般可在室温下操作。血清蛋白于25℃时较0℃更易分出。但对温度灵敏的蛋白质,则应于低温下盐析。